液相色谱HPLC五大分类

HPLC分类

1、反相模式 (RP-LC)

2、反相离子对色谱 (IPC) 

3、正相模式 (NP-LC)
4、离子交换色谱 (IEC)

5、尺寸排阻色谱 (GPC / GFC)
 

反相模式 (RP)

填料：C18 (ODS)、C8 (octyl)、C4 (butyl)、苯基、TMS和氰基

相互作用力:

反相模式下流动相的选择：

优化水相（缓冲液）和有机相的比例非常重要（甲醇，乙腈和 THF 是常用的有机溶剂）

在有缓冲液的情况下, 缓冲液的浓度和pH值非常重要

增加流动相极性：

固定相极性变化对分离的影响：

固定相极性变化对分离的影响：

离子对色谱

离子对试剂

•阴离子化合物：氢氧化四丁基铵、溴化四丁基铵

•阳离子化合物：丁烷基磺酸钠(C4)、戊烷基磺酸钠(C5)、己烷基磺酸钠(C6）、庚烷基磺酸钠(C7)、辛烷基磺酸钠(C8)、癸烷基磺酸钠(C10)、十二烷基磺酸钠(SDS)

离子对色谱影响因素

•离子对试剂的类型

•离子对试剂的浓度

•流动相的pH

正相色谱

色谱柱：

•硅胶柱:常用

•氰基柱: 常用

•氨基柱: 分析糖

•二醇基柱: 分析蛋白质

相互作用力

氢键力

•如果样品有

–-COOH: 羧基

–-NH2: 氨基

–-OH: 羟基

则氢键力强.

•如果样品没有任何官能团，象碳水化合物

•如果样品有大的基团, 由于空间障碍

则氢键力弱.

正相模式下流动相的选择：

•主要试剂：烷烃(戊烷, 己烷, 庚烷, 辛烷)、芳香烃(苯, 甲苯, 二甲苯)、二氯甲烷–氯仿

•辅助试剂：甲基-t-丁基醚(MTBE)、*(THF)、二氧杂环乙烷、嘧啶、乙酸乙酯、乙腈、丙酮、异丙醇、乙醇、甲醇

为了调整保留时间，可以选择主要试剂然后再加入辅助试剂。

增加流动相极性：

反相色谱与正相色谱的对比：

反相：保留时间重复性好、固定相耐用

正相：对立体异构体有很好的分离(Vitamin E等)、保留时间重复性稍差

离子交换色谱：

离子交换色谱应用：

生物领域(蛋白质, 农药, 氨基酸分析)

离子分析

阳离子交换剂：强阳离子交换剂(SCX)(R-SO3-)

弱阳离子交换剂(WCX) (R-COO-)

阴离子交换剂：强阴离子交换剂(SAX) (R4N+)

弱阴离子交换剂(WAX)(DEAE)

尺寸排阻色谱法（SEC）