HPLC法测定黄蜀葵花中金丝桃苷的含量

    黄蜀葵花为锦葵科植物黄蜀葵（Abelmoschus manihot (L. ) Medic）的干燥花冠，具有通淋、消肿、解毒等功效，多用来治疗淋病、痈疽肿毒、烫伤等。有研究指出黄蜀葵花的主要成分为黄酮类化合物，其中以金丝桃苷、槲皮素，异槲皮素含量zui高。本文利用天津兰博*代理的美国兰博液相色谱仪建立了测定黄蜀葵花中金丝桃苷的含量的HPLC法，结果表明方法简单准确，结果可靠。

1.1 仪器

分析型液相色谱仪（HPLC），由AS3000自动进样器，Laballiance Series 高压泵、DAD检测器和Lablliance色谱工作站组成，配一支C18 Kromasil 色谱柱( 4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；AXM-8 Temp.柱温箱。

1.2试剂和样品

金丝桃苷对照品品（中国药品生物制品检定所），乙腈（色谱纯），水为屈臣氏蒸馏水，其他试剂为分析纯，黄蜀葵花样品购自当地药店，产地为安徽。

1.3对照品溶液配制

精密称取金丝桃苷对照品5.00 mg，加甲醇定容至25 mL，制成0.200 g/L的金丝桃苷对照品储备液，冷藏备用。

1.4供试品溶液的制备

精密称取样品粉末200 mg，70%甲醇溶解，超声30 min，过滤液置于50mL容量瓶中，加70%甲醇定容至刻度，冷藏备用。

1.5色谱条件：

色谱柱：Kromasil (4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；

流动相：乙腈-0.5%磷酸水溶液（v/v=20:80）

柱温：40℃；

流速：1.0 mL/min；

检测波长：360 nm；

进样量：20 uL。

2测试结果

2.1检测波长的选择

取金丝桃苷对照品溶液和样品溶液，分别进行紫外光谱扫描，金丝桃苷在258nm和360nm有两个zui大吸收峰，兼顾样品和对照品，所以我们选用测定波长为360nm。

图1 金丝桃苷对照品的液相色谱图

2.2线性关系、方法检出限考察

分别移取金丝桃苷对照品储备液0.5、1、2、3、4 mL，分别用甲醇定容至10 mL，配制得到一系列对照品溶液。取上述溶液各20 uL，按1.5所述色谱条件进样分析。以峰面积Y为纵坐标，进样量X（ug）为横坐标，绘制标准曲线，得线性方程。金丝桃苷的线性回归方程为Y = 209253 X +9531.5，r = 0.9998，线性范围为2～16 ug；以3倍信噪比计算该方法的zui低检测限为30 ng.

2.3精密度和重现性实验

取供试品溶液重复进样6次，每次20 uL，测定峰面积。金丝桃苷峰面积测定结果的RSD为1.34%，表明方法精密度良好 。

取样品，按1.4条件制备6份供试品溶液，分别进样20 uL，测定峰面积，计算金丝桃苷的含量，含量测定结果的 RSD为1.03%，表明方法重现性良好。

2.4稳定性实验

取样品溶液分别在0、2、4、8、12按1.5的色谱条件进样，（不测时于冰箱4℃冷藏），测定峰面积，峰面积的RSD分别为1.86%，结果表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.5加标回收率实验

精密称取已知金丝桃苷含量的黄蜀葵花样品，分别加入不同含量的金丝桃苷对照品，按1.4项下方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率，结果如表1。

表1 加标回收试验结果

3结论

黄蜀葵花的主要化学成分是黄酮类，其中金丝桃苷，含量较高，活性较强，且性质稳定，所以选择测定金丝桃苷的含量做为质量控制的指标。本文采用液相色谱法测定黄蜀葵花中金丝桃苷的含量，经过精密度、回收率等试验考查，均符合要求。该方法灵敏，快速，准确，可用于对黄蜀葵花的质量进行评价。