液相色谱结合兰博柱后衍生系统 测定维生素B1

液相色谱柱后衍生法测定维生素B1

维生素B1又称硫胺素，是人体生长和发育所必需的营养物质，在食品和保健品中广泛应用，因此如何快速准确的测定就显得非常重要。维生素B1经氧化后，与铁KCN 在碱性条件下可以生成有荧光的物质。本方法以此为依据，建立了液相色谱-柱后衍生法测定维生素B1。

1 材料和方法

1.1试剂

维生素B1标准品，购自Sigma公司；无水醋酸钠，冰醋酸，氢氧化钾，水为屈臣氏蒸馏水，甲醇为色谱纯。

0.05 mol/L醋酸钠溶液（pH = 4.5）：称取醋酸钠4.10 g加水溶解，并用冰乙酸调节pH = 4.5，然后稀释至1000 ml；

0.25 g/L碱性铁KCN溶液（吸取10 g/L铁KCN溶液5 ml用100 g/L的氢氧化钾溶液稀释至500 ml）。

1.2仪器

分析型液相色谱仪（HPLC），由AS3000自动进样器，Lablliance Series 高压泵，天津兰博第三代 PCR3柱后衍生装置，Varian9075荧光检测器和Lablliance色谱工作站组成，配一支Kromasil C₁₈色谱柱(4.6 x 250 mm, 5 um)；AXM-8 Temp.柱温箱

1.3色谱条件

色谱柱：Kromasil C₁₈色谱柱(4.6 x 250 mm, 5 um)，天津兰博实验仪器有限公司；

流动相：0.05 mol/L醋酸钠溶液（pH=4.5）/甲醇=95/5；

流速：1.0 ml/min；

柱温：室温；

进样量：10 ul；

衍生剂：0.25 g/L碱性铁KCN溶液；

流速：0.3 ml/min；

衍生温度：室温；

检测波长：激发波长375 nm，发射波长435 nm。

2 试验结果

2.1 流动相的选择

根据维生素B1的性质，优化流动相配比，选择0.05 mol/L醋酸钠溶液（pH=4.5）/甲醇=95/5为流动相，标准品色谱图1所示。

2.2线性关系考察

称取0.0500g 的维生素B1标准品，用蒸馏水溶解并定容至100 ml，放于冰箱中备用。测定时将储备液稀释至浓度为10.0 ug/ml，过0.45um滤膜，配制标准系列浓度为0.01、0.05、0.10、0.20、1.0、10.0 ug/ml。

结果表明在0.01到10.0 ug/ml浓度范围内，以进样浓度为横坐标，出峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程Y=7.46×10⁶X，r=0.9998，维生素B1有良好的线性关系。

2.3重现性考察

精密吸取浓度为0.05 ug/ml标准品溶液10 uL，进液相色谱仪测定，重复进样5次，记录峰面积，计算峰面积标准偏差，得维生素B1的RSD=1.8%。

3结论

本方法具有方便、准确、灵敏度高、精密度好等优点，且线性范围宽, 重现性好，可以满足日常分析需要。