Pickering 试剂包（CB130 / CB910 / O120 / 3700-2000）介绍、配制与使用

Pickering 氨基甲酸酯柱后衍生试剂包（CB130 / CB910 / O120 / 3700-2000），整套试剂用于 HPLC 柱后衍生 荧光法检测氨基甲酸酯类农药残留，符合 EPA 531.1、AOAC 985.23 标准，广泛应用于水质、果蔬、粮食中甲萘威、灭多威等 23 种氨基甲酸酯农残检测。

 一、各组分产品介绍

 1. CB130 水解试剂 Hydrolysis Reagent

规格：4×950 mL，0.05 mol/L NaOH，色谱级，内含 C47™络合剂Pickering ...

作用：第一阶段柱后水解试剂。色谱分离后的氨基甲酸酯在 100℃反应器中碱性水解，断裂氨基甲酸酯键，生成甲胺，为 OPA 荧光反应提供底物；C47 络合 Ca²⁺、Mg²⁺，硬水样品不易产生矿物质沉淀，保护管路、减少基线漂移与堵塞风险。

pH≈12.5，强碱性。

 2. CB910 OPA 稀释剂 OPA Diluent

规格：4×950 mL，硼酸盐缓冲体系，色谱级缓冲液

作用：配制 OPA+Thiofluor 第二衍生试剂的基底缓冲液，维持衍生反应稳定 pH（pH≈9.1）；低胺杂质，降低荧光背景噪声，每批次均经过 HPLC 柱后实测验证。

 3. O120 邻苯二甲醛 OPA（o-Phthalaldehyde）

规格：5g 固体粉末

作用：荧光衍生核心底物，和甲胺、硫醇试剂共同反应，生成具有强荧光信号的异吲哚类衍生物。

 4. 3700-2000 Thiofluor™硫氟试剂

规格：10g 固体，N,N 二甲基 2 巯基乙胺盐酸盐

作用：OPA 衍生配套硫醇助剂，替代传统 β巯基乙醇；气味极低、挥发性小，不易污染柱后衍生仪阀件和气路；配制后的工作液稳定性更好，荧光产物寿命更长。参考等效：2g Thiofluor ≈1mL β巯基乙醇。

 二、试剂配制方法（标准配比，950 mL CB910 体系）

试剂 1：CB130 水解试剂直接使用，无需稀释，原装瓶上机。

 试剂 2（OPA+Thiofluor 工作液，现配现用，避光保存）

1、将945ml稀释剂(CB910)倒入试剂瓶，留5ml待第5步使用；

2、将稀释液脱气；

3、将100mg邻苯二甲醛（0120）置于一个干净的烧杯中，加10ml色谱级甲醇，混匀；

4、将溶解的邻苯二甲醛溶液倒入脱气的稀释液中，可添加1-2ml的甲醇清洗烧杯；

5、称2g巯基乙醇（3700-2000）溶解于保留的5 ml稀释液中，并转移到脱气的稀释液中。

 三、仪器条件与上机使用方法

 适用设备

HPLC + Pickering Pinnacle PCX（或同类型）柱后衍生系统 + 荧光检测器

1. 色谱柱：氨基甲酸酯专用 C8/C18 色谱柱（如 0840250 / 0846250），配套保护柱

2. 柱温：常温，按方法设置梯度流动相（甲醇 / 水或乙腈 / 水）

3. 柱后衍生参数

   试剂 1（CB130）泵流速：0.3 mL/min

   第一反应器（水解）：100 ℃，0.5 mL 反应线圈；氨基甲酸酯水解生成甲胺

   试剂 2（OPA+Thiofluor/CB910）泵流速：0.3 mL/min

   第二反应器（衍生）：室温，0.1 mL 反应线圈；甲胺 + OPA+Thiofluor 生成荧光产物

4. 荧光检测器参数：激发波长 330 nm，发射波长 465 nmPickering ...

 操作流程

1. 开机，HPLC 流动相平衡色谱柱；柱后衍生系统预热至水解反应器 100℃；

2. 分别将 CB130、配制好的 OPA-Thiofluor 工作液连接至柱后两台试剂泵，充分排气、冲洗管路；

3. 基线稳定后，进标样，校准保留时间、峰面积，做标准曲线；

4. 进样品测试；

5. 实验结束清洗：纯水冲洗衍生管路，再用甲醇冲洗管路，排空，关机。

 四、关键注意事项

1. 避光：OPA、Thiofluor 工作液对光敏感，试剂瓶必须棕色瓶，配制、储存全程避光；

2. 区分两种试剂：CB130 是水解碱液，CB910 是 OPA 缓冲稀释液，严禁接反泵管路，接反会无峰、基线异常甚至损坏系统；

3. 水质：样品前处理用水建议超纯水；水样基质硬度高时，CB130 中 C47 可抑制钙镁沉淀，但仍建议样品前处理除杂；

4. 安全：CB130 为强碱，OPA、Thiofluor 有刺激性，操作佩戴护目镜、手套，避免皮肤接触；废液按实验室危废处理；

5. 储存：固体 O120、3700-2000 常温干燥避光保存；CB130、CB910 原液常温避光；配好的 OPA 工作液不可久放。

 五、应用范围

水质、蔬菜、水果、谷物等基质中N 甲基氨基甲酸酯类农药残留检测，满足国内农残检测以及 EPA、AOAC 标准方法，适配食品、环境监测实验室。