各种类型的色谱泵有不同的操作方法。可以参照各自的操作手册。现简要介绍如下:
1、准备好工具和所需部件。工具包括扳手、10#木螺钉、超声清洗粉、垫圈安装工具、新垫圈。用水-甲醇冲洗泵,拆开进出口管道,在泵头和单向阀上标出液流方向。
2、将柱塞杆缩至zui小,松开色谱泵泵头的两根收紧螺丝,小心托住泵头。操作时要注意处处以平衡的动作慢慢退出泵头,切不可摇动或上下左右摆动泵头,否则柱塞杆极易折断。退出泵头后,柱塞杆还留在泵上。
3、用10#的木螺钉旋进就螺钉孔中轻轻拨出旧垫圈,注意不要划破泵头。要毫不犹豫的扔掉旧的垫圈。
4、将色谱泵泵头和新垫圈分别放入甲醇中超声清洗,同时用无纤维纸擦洗柱塞杆。查看柱塞杆上有无划痕,如有划痕则应先更换新的柱塞杆在换新的垫圈。
5、安上新垫圈。这一步要用专门的安装工具,切不可粗心大意,避免损坏垫圈。有写公司专门出售安垫圈的工具,有详细的说明与图解。选一根略粗于柱塞杆的不锈钢杆,截成约5厘米长,一端精密磨制成与柱塞杆同粗细的、有很高光洁度的面。选一根直径大于柱塞杆约2mm、壁厚2 mm,长约3cm,一端截面平整光滑的铜管,操作时将不锈钢杆光滑端从垫圈无弹簧的一侧轻轻插入,插至垫圈不掉下来即可。将垫圈有弹簧的一侧对准泵室,再给不锈钢杆套上铜管,用光滑的一面轻轻向泵室压垫圈,同时抽出不锈钢杆,继续用拇指将垫圈压入泵头,加上垫圈。
6、重新装上色谱泵泵头。先在柱塞杆上滴几滴甲醇以湿润,滑动泵头到位。千万不能摇动或摆动,以防止柱塞杆在这一步操作时折断。平衡地上紧固定螺丝,接上进液管道。
7、zui后,打脱气的甲醇到泵腔中,不断用纸巾从泵出口处吸去流动液,等无气泡溢出时再接上输出管道,打开泄液阀,继续抽20ml甲醇赶走气泡后,换成需要的流动相。
为了延长色谱泵的使用寿命和维持其输液的稳定性,必须按照下列注意事项进行操作:
①防止任何固体微粒进入泵体,因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀,因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相在玻璃容器内蒸馏,而常用的方法是滤过,可采用Millipore滤膜(0.2m或0.45m)等滤器。色谱泵的入口都应连接砂滤棒(或片)。输液泵的滤器应经常清洗或更换。
②流动相不应含有任何腐蚀性物质,含有缓冲液的流动相不应保留在泵内,尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。如果将含缓冲液的流动相留在泵内,碳硫分析仪由于蒸发或泄漏,甚至只是由于溶液的静置,就可能析出盐的微细晶体,这些晶体将和上述固体微粒一样损坏密封环和柱塞等。因此,必须泵入纯水将泵充分清洗后,再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂。
③色谱泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完,否则空色谱泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环,zui终产生漏液。
④输液泵的工作压力决不要超过规定的zui高压力,否则会使高压密封环变形,产生漏液。
⑤流动相应该先脱气,以免在泵内产生气泡,碳硫分析仪影响流量的稳定性,如果有大量气泡,泵就无法正常工作。
如果色谱泵产生故障,须查明原因,采取相应措施排除故障:
①没有流动相流出,又无压力指示。原因可能是泵内有大量气体,这时可打开泄压阀,使泵在较大流量下运转,将气泡排尽,也可用一个50ml针筒在泵出口处帮助抽出气体。色谱泵另一个可能原因是密封环磨损,需更换。
②压力和流量不稳。原因可能是气泡,需要排除;或者是单向阀内有异物,可卸下单向阀,浸入丙酮内超声清洗。有时可能是砂滤棒内有气泡,或被盐的微细晶粒或滋生的微生物部分堵塞,这时,可卸下砂滤棒浸入流动相内超声除气泡,或将砂滤棒浸入稀酸内迅速除去微生物,或将盐溶解,再立即清洗。
③色谱泵压力过高的原因是管路被堵塞,需要清除和清洗。压力降低的原因则可能是管路有泄漏。检查堵塞或泄漏时应逐段进行。