美国兰博液相色谱法测定牡丹皮中丹皮酚的含量

液相色谱法测定牡丹皮中丹皮酚的含量

牡丹皮为毛茛科植物牡丹的干燥根皮，味苦、性微寒，具有清热凉血，活血散瘀的功能。丹皮酚是丹皮中重要的有效成分，具有镇静、催眠、抗菌、抗炎、抗氧化、降血压等多种功效。目前采用液相色谱测定丹皮酚的含量是丹皮及其制剂质量的控制指标。本文采用天津兰博的液相色谱系统，建立了检测丹皮中丹皮酚的含量的方法，结果显示方法简便，结果可靠。

1 测试条件

1.1 仪器

分析型液相色谱仪（HPLC），由AS1000自动进样器，Lablliance Series 高压泵、DAD检测器和Lablliance色谱工作站组成，配一支C18 Kromasil 色谱柱( 4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；AXM-8 Temp.柱温箱。

GC6500美国兰博液相色谱仪

1.2试剂和样品

丹皮酚标准品（中国药品生物制品检定所），甲醇（色谱纯），水为屈臣氏蒸馏水，其他试剂为分析纯，丹皮样品购自当地药店，来源安徽铜陵。

1.3标准溶液配制

精密称取丹皮酚标准品4 mg于100 mL容量瓶中，用甲醇醇溶解并定容至刻度，摇匀备用，配成40 ug/mL浓度的标准储备液。测定前用流动相稀释成所用浓度。

1.4供试品溶液的制备

取本品粗粉约0. 5 g，精密称定，置50 mL具塞三角瓶中，精密加入甲醇 25 mL，称定重量，超声提取30 min, 放冷, 加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液2 mL，置25 mL量瓶中, 加甲醇稀释到刻度, 摇匀。

1.5色谱条件：

色谱柱：Kromasil (4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；

流动相：50%甲醇-水溶液（v/v）

柱温：室温；

流速：1.0 mL/min；

检测波长：274 nm；

2测试结果：

2.1 色谱系统适应性测试

按1.5的测试条件对丹皮酚标准品进行检测，所得色谱图如图1 所示，以丹皮酚计算理论塔板数不小于3000。

2.2线性关系、方法检出限考察

精密吸取丹皮酚标准品溶液2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10 mL置10 mL 量瓶中，流动相稀释至刻度，各进样 20 uL，测定峰面积积分值。以对照品溶液浓度(mg/L)对峰面积进行回归，结果表明丹皮酚峰面积积分值与浓度C呈良好的线性关系，回归方程为： Y = 82. 64 + 41362. 8C，R= 0. 9998，线性范围为 0. 36～2.2 ug。

2.3丹皮酚稳定性实验

取丹皮酚标准品溶液, 于配制后的 0、2、4、8、12、20、24和 48 h测定, 结果表明在 48 h内稳定, 峰面积的相对标准偏差 (RSD )为 0.98% 。

2.4丹皮酚精密度和重现性实验

取丹皮供试品溶液10 uL重复进样8次，根据所得面积值计算， RSD =0. 60%。取丹皮药材6份，平行进行提取测定，求得丹皮酚含量的 RSD 为1. 82%。

2.5丹皮酚回收率实验

精密称取 8份丹皮药材样品0. 5 g，分别加入相当于含丹皮酚0. 75 mg、0. 25 mg的对照品溶液各4份，按1.4方法提取后进样分析，测得丹皮酚的回收率分别为 97. 96，98. 21，RSD 为1. 84、1. 56。进行加样法测定回收率, 平均回收率99. 21% , RSD= 1.60%。

3结论

采用液相色谱对丹皮酚进行测定，结果显示本方法方便、准确、精密度高，重现性好，可以用来对于药材适量进行监测。